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分子标记检测方法:SNP检测可实现全程自动化

来源:环球粮机网发布时间:2015-06-30 11:26:18

 国以农为本,农以种为先。培育和生产优良的种子是种业的核心任务,而我国目前的种业市场存在品种间同质化严重、套牌侵权泛滥、种子质量良莠不齐等问题,育种单位间的种质资源难以正常流动,但育种材料流失依然严重,这些问题严重制约着我国现代种业的发展。解决这些问题的根本在于对种质资源、育种材料和作物品种进行有效保护,从DNA水平上对农作物品种和材料进行鉴定是实施品种保护的基础。

  目前,SNP检测作为最新的分子标记检测方法,已被众多国际组织,如国际种子检验协会(ISTA)、国际植物新品种保护联盟(UPOV)、国际种子联盟(ISF)等,推荐为DNA水平上品种鉴定的方法。杜邦先锋、孟山都和先正达等国际一流农业公司也都采用了SNP标记对内部的育种材料和不同品种进行分类鉴定。农业部最近印发的《农作物品种DNA身份鉴定体系构建实施方案》也标志着我国DNA水平上的品种鉴定将实施采用SNP技术。

  我们知道,不同人在基因水平上是有很大差异的。同样,同一作物的不同品种在DNA水平上也有很多差异,SNP是由单个核苷酸(A,T,C,G)的改变而引起的DNA序列的变化。例如在一个品种中某一位点上的核苷酸是A,但在另一品种中则变成了T,这种单核苷酸水平上的变化可以稳定遗传,并能通过一定手段被准确检测。品种之间也有不少位点存在着这样的稳定差异,通过比较不同的SNP位点就可有效区分不同的品种和育种材料。

  目前常用的SNP检测方法有3种:

  高通量SNP检测。用PCR的方法特异扩增目标位点,在反应体系中加上能区分SNP型的荧光引物或探针,反应完成后通过检测荧光信号就可以判断该SNP位点上核苷酸类型。这种检测方法已经非常成熟,全程可使用自动化技术,检测过程无需人为干预,因而具有成本低、可重复性高、快速准确可靠等特点,非常适合对大量样本的SNP检测。华智水稻生物技术有限公司引进的LGCSNPLine系统和道格拉斯的ArrayTape系统即属于该类,可迅速检测几百到几万份样本中的SNP位点。

  SNP芯片技术。将大量的SNP探针固定在一张芯片上,将品种样本DNA与芯片杂交,通过采集芯片上的荧光信号,可一次检测该品种中成千上万个SNP位点。目前市面上已有Affymetrix和Illumina公司提供SNP芯片和相应设备。比较而言,SNP芯片技术检测一个样本的成本较高。

  测序检测。该方法通过对全基因组或目标位点扩增后进行测序,直接读取相关位点的核苷酸碱基类型,从而可检测出不同品种间的SNP位点差异。该方法能产生大量的序列数据,可能发现一些未知的DNA变异,但需要专业的生物信息分析,目前成本相对比较高,技术的成熟度也不如前两种。

  高通量SNP检测方法对DNA样本的质量要求不高,可使用全自动设备提取的DNA样本,操作简捷快速。SNP检测过程全程自动化操作,无需开盖操作,不仅结果准确,重复性高,还能降低人工和试剂的成本,其功能类似于识别品种身份的“读卡器”。更多相关信息,还请您继续关注我们的官方网站,环球粮机网 http://www.worldlj.com/

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