公告信息：
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
随着我国油脂产业的迅速发展，市场上出现了一些新型调和油，DHA食用调和油产品在市场上迅速推广并且在消费者中得到广泛认可，与产品得到迅速发展形成鲜明对比的是，相关DHA食用调和油产品的DHA含量检测方法却处于停滞状态。因此，开展对DHA食用调和油中DHA含量检测方法的研究，可进一步规范和服务DHA食用调和油的发展。目前国内外测定油中DHA的常用色谱方法分为内标法和外标法。国标方法如GB／T5009．168-2003(食品中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的测定)、GB／T17377-2008(动植物油脂脂肪酸甲酯的气相色谱分析)、GB／T5413．27—2010(婴幼儿配方食品和乳粉DHA、EPA的测定)等均采用外标法。国际上测定DHA的方法如AOCSOmcialMethodCe1b-89(用气液色谱法测定海洋鱼油中脂肪酸组成)、AOACOficialMethod991．39(气相色谱法微胶囊鱼油和甲酯、乙酯鱼油中脂肪酸的测定)、AOACOficialMethod996．06(食品中脂肪酸的测定)等均采用内标法来测定DHA或其他脂肪酸含量。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
本文采用气相色谱法测定海藻油和DHA调和油中DHA的含量，并将GB／T5009．168、AOCSOfficialMethodCe1b-89和GB／T173773种方法测定结果进行对比，以期找出最合适的DHA含量测定方法。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1材料与方法
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．1实验材料
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
DHA标准品(纯度≥99％)、c23:0甲酯标准品(纯度≥99％)：购自成都博奥生物科技公司；海藻油(DHA含量37．0％)：MartekBiosciencesCorporationColumbia，USA；DHA调和油：自制；正己烷、甲醇、氢氧化钠、氯化钠、异辛烷、无水硫酸钠、盐酸，均为分析纯。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．2实验设备
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
岛津GC一2010Plus气相色谱仪，R一201旋转蒸发仪，SHB—B95型循环水式多用真空泵，SartoriusBS224S分析天平。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．3实验方法
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
以海藻油为原料调配DHA调和油，首先根据海藻油中DHA的含量，调配出DHA含量为200mg／kg的食用调和油，以此进行DHA检测方法的研究。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．4测定方法
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．4．1GB／T5009．168测定海藻油及DHA调和油中的DHA含量
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．4．1．1前处理
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
称取1g油样于50mL具塞容量瓶中，加人10mL正己烷轻摇使油样溶解。吸取此溶液1～5mL于具塞比色管中，加入2mol／L氢氧化钾甲醇溶液1mL，充分振荡10rain后放人60℃水浴加热1～2rain，冷却到室温，待甲酯化用。加入2mol／L盐酸甲醇溶液2mL，充分振荡10min，并于50℃加热2min，弃去下层液体，再加约2mL蒸馏水洗净并去除水层，用滴管吸出正己烷层，移至另一装有无水硫酸钠的漏斗中脱水，脱水后的溶液在70℃水浴上加热浓缩，定容至1mL，待上机分析。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．4．1．2色谱条件
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
PEG一20M毛细管脂肪酸分析柱(30m×0．53mmx1m)，氢离子火焰检测器(FID)温度220℃，进样口温度210℃，柱温185℃，载气(He)流速6．0mL／min，氢气流速40mL／min，空气流速400mL／min。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．4．2GB／T17377测定海藻油及DHA调和油中的DHA含量
1．4．2．1前处理
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
称取350mg油样加人50mL烧瓶中，移取6mL0．5mol／L氢氧化钠甲醇溶液于油样中，并加入几粒沸石，连接回流装置，开始加热回流，回流过程中不断摇动烧瓶；当烧瓶内油珠消失，溶液变得透明时，从冷凝器上端加7mL15％三氟化硼甲醇溶液于烧瓶内，继续回流1min；然后从冷凝管上端加入4mL异辛烷，再回流1min；撤离热源，取出烧瓶，向烧瓶中加入5mL饱和氯化钠溶液，轻轻上下颠倒数次后，静置分层；将异辛烷提取物集中在一起，并加入适量的无水硫酸钠以去除痕量的水分，浓缩至1mL，待上机分析。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．4．2．2色谱条件
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
聚酯毛细管色谱柱(30m×0．53mm×1μm)，氢离子火焰检测器(FID)温度230℃，进样口温度210℃，柱温180℃，载气(He)流速5．0mL／min，氢气流速70mL／min，空气流速400ml/min。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．4．3AOCSOficialMethodCelb一89测定海藻油及DHA调和油中的DHA含量
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．4．3．1前处理
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
精确称取约25mg的C23:0甲酯内标物于25mL容量瓶，然后用异辛烷定容，吸取1mL的内标液加入试管中并把溶剂蒸发，将试管冷冻保藏(不立即使用时)；精确称取25mg油样加入含有内标物的试管，添加1．5mL0．5mol／L氢氧化钠甲醇溶液，盖紧盖子，振摇并加热到100℃保持5min；冷却，添加2mL15％三氟化硼甲醇溶液，充氮保护，盖紧盖子，振摇并加热到100℃保持30min；冷却到30～40℃，添加1mL异辛烷，充氮保护，加盖，振摇或者激烈摇晃30S；立即加人5mL饱和氯化钠溶液，充氮，加盖并激烈振摇；冷却到室温，当异辛烷层和水层分离后，将异辛烷层转移到干净的试管中，充氮，加盖；再用1mL异辛烷提取水相；将异辛烷提取液集中在一起，浓缩至1mL，待上机分析。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
1．4．3．2色谱条件
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
Supercowax一10毛细管脂肪酸分析柱(30m×0．32mm×0．25μm)；氢离子火焰检测器(FID)温度270℃；进样口温度250；柱箱起始温度170℃，保持0min，程序升温至225℃，保持0min，升温速率1．0℃／min；载气(He)流速6．0mL／min，氢气流速40mL／min，空气流速400ml/min。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
2结果与讨论
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
2．1 3种方法测定海藻油中的DHA
对海藻油进行脂肪酸检测，由于海藻油中DHA含量较高，3种方法都能比较准确地检测DHA的含量，经检测海藻油中DHA含量为36．6％～37．1％(见表1)，与Martek提供的数据一致。图1为采用GB／T5009．168方法检测海藻油中DHA含量的色谱图。
2．2 3种方法测定调和油中的DHA
图2为GB／T5009．168方法检测的色谱图。由图2可见，可以检测到DHA峰，DHA调和油中DHA由出峰时间为29．212min，峰分离情况良好。
图3为GB／T17377方法检测的色谱图。由图3可见，图中没有检测到DHA峰。实验发现，反复进样，仍然检测不到DHA，说明该方法不适用于DHA含量较低样品的检测。
图4为AOCSOfficialMethodCelb一89法测定DHA调和油中DHA含量的色谱图。由图4可知，DHA调和油中DHA的出峰时间为29．531min。实验发现，测定稳定性较差，该法采用内标法，操作程序较为麻烦，寻找合适的内标物也很困难。因此，该方法不适用于DHA含量低的DHA食用调和油的检测。
综上所述，对于DHA含量较高的海藻油，3种方法都能比较准确地检测DHA含量，而对于DHA含量较低的DHA食用调和油，GB／T17377方法未能有效检测到DHA，而AOCSOfficialMethodCe1b一89法稳定性较差，并采用内标法，操作程序较为麻烦，寻找合适的内标物也很困难。因此，选择GB／T5009．168方法作为DHA食用调和油中DHA含量的检测方法，该法峰分离情况良好，采用外标法，操作简便、易行、安全。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
2．3DHA标准曲线的建立
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
根据GB／T5009．168方法，采用DHA作为标准品进行分析检测，以DHA质量浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，得到标准曲线，见图5。
DHA标准曲线方程为：Y=926263X一23140．R2=0．9998
该标准曲线在DHA含量为(0～1．0)×103mg／kg范围内线性良好。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
2．4测定DHA调和油中DHA的含量
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
根据GB／T5009．168方法，参照标准曲线，测定调和油中的DHA含量。结果表明，调和油中DHA含量测定结果在190-210mg／kg之间，在误差范围之内，并经反复验证，对于不同范围低含量的DHA食用调和油，可准确检测其DHA含量，检测结果准确可靠。
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
3结论
中国油脂杂志、中国油脂网www.chinaoils.cn、油脂设备；粮油机械；食用油；植物油；花生油
对GB／T5009．168、GB／T17377、AOCSOficialMethodCelb一89测定方法比较可以看出，对于DHA含量较高的海藻油，3种方法均能准确检测出其中的DHA含量；而对于DHA含量较低的DHA食用调和油，GB／T5009．168方法则准确可靠，重复性好，并且采用外标测定法，相对比较简单易操作，能较好地满足DHA食用调和油中低含量的DHA检测需求。
