公告信息：
样品经适当的萃取后，采用高效液相色谱法(HPLC)，选择TBHQ、PG、OG、BHA、BHT的甲醇溶液最佳吸收波长280nln，采用甲醇和1％乙酸溶液梯度洗脱的方法进行检测。本研究建立了一种高效液相色谱简单、准确测定油脂中5种常用抗氧化剂的方法，该方法能有效分离检测TBHQ、PG、OG、BHA和BHT等5种常用抗氧化剂，使用溶剂量少、检测效率高、检测限低，能满足食用植物油中抗氧化剂的检测。
1材料与方法
1．1材料与试验仪器
1．1．1仪器
日本岛津20ATVP(附紫外检测器)
1．1．2材料
食用调和油；TBHQ、PG、OG、BHA、BHT购于美国AccuStandard公司。无水乙醇、乙腈，分析纯；丙酮、乙酸、正己烷、甲醇，色谱纯；超纯水。
标准溶液：(1)标准溶液A：准确称取100mg
TBHQ，用甲醇溶解并定容至100mL，此溶液浓度为1mg／mL，溶液避光低温保存；(2)标准溶液B：分别准确称取100mgBHA、BHT、PG和OG，用甲醇溶解并定容至100mL，此溶液中PG、BHA、OG和BHT浓度分别为1mg／n~，溶液避光低温保存；(3)标准溶液A+B：分别准确移取一定量的标准溶液A与B至10mL容量瓶中，用甲醇定容，分别配制得到O．01、0．02、0．05、0．08、0．10mg／mL的标准工作液。由于5种组份的混合标准溶液不稳定，标准溶液A+B使用前配制。
1．2方法
1．2．1色谱条件表2不同提取溶剂对抗氧化剂回收率的影响(％)色谱柱，C18不锈钢柱(德国默克公司，150mm~4．6ITI1TI，5urn)柱温：35℃；检测波长：280nnl；流速：1．0mL／min；进样量：5。
1．2．2样品处理
准确称取1．0g油样，置于10mL离心管中，加入溶剂溶解，混匀后，冰水冷却后，以3000r／min离心15min，吸取上清液于圆底烧瓶中，按要求重复几次，合并上清液，浓缩后用甲醇定容至10mL，过0．45岫过滤器后进高效液相色谱仪测定。
2结果与讨论
2．1检测波长的选择
试验分别对5种目标物质的甲醇溶液进行了紫外扫描，结合查阅历史文献等资料，最终确定这5种目标物质的甲醇溶液的最佳检测波长在280am。
2．2分离条件的选择
通过试验发现，采用无梯度的甲醇／水作流动相不能将这5种目标物质进行了分离，如果梯度洗脱的话，虽可同时分离这5种目标物质，但PG的拖尾峰很厉害，因此实验了不同配比的甲醇／水、乙腈／水和甲醇／乙酸，结合国内外资料，在总结试验的基础上最终优选出流动相设定条件如表1，在此条件下不但能很好分离出这5种目标物，而且能够实现样品中的干扰成分与目标物有效分离。
2. 3提取溶剂的选择
本研究采用了甲醇、乙醇、丙酮、正己烷、乙腈作为提取溶剂，比较了它们的提取效果，试验结果列于表2。结果表明甲醇、乙醇、乙腈的回收率都不错，回收率分别在90．6％~95．3％、89．9~／o~94．9％、90．8％~96．8％，而丙酮的效果最差，回收率只有71．7％~78．5％，但考虑到乙腈的毒性比较强，最终筛选出甲醇作为提取溶剂。
2．4不同体积的选择
实验中分别设置了5mL、5mL+5mL、5mL+5mL+5mL、10mL(其中提取体积为10mL时放在5OmL离心管中提取)几种提取方式，从提取的效果(见表3)来看，5mL和10mL的提取效果不太好，尤其是10mL甲醇提取液放在50mL离心管中提取的效果更差，BHT的回收率只有75．4％，其中5mL+5mL和5mL+5mL+5mL的回收率分别达到9O．7％、6．7％、90．9％、7．1％，从实验结果看，分别进行两次以上效果比较好，但是随着提取次数的增加，不但实验过程复杂、浪费溶剂，而且回收率提高的也不明显，因此实验最终确定5mL+5mL作为提取方式。
2．5不同提取方式的选择
实验中分别采用手动混匀、涡旋振荡、超声处理和摇床振荡四种提取方式进行提取效果的比较(见表4)，通过实验发现涡旋振荡的提取回收率最好，分别达到92．2％~97．4％。
2．6不同时间的选择
实验中分别设置涡旋振荡2rain、5min、10min、30rain，结果见表5，从表5看出其中振荡2min的提取回收率最低，随着振荡时间的延长，提取回收率逐渐增加，但是超过10min后回收率的提高已经不明显了，所以实验中确定涡旋振荡10min为最佳时间。
2．7检出限和线性范围
配制的标准工作溶液注入高效液相色谱仪进行测定，以组份的峰面积为纵坐标，组份的质量浓度为横坐标绘制标准曲线。浓度在0．02M)．10pJL范围内，TBHQ、PG、OG、BHA、BHT的标准曲线都有很好的线性回归方程、相关系数和检出限见表6。
2．8回收率
采用上述建立的方法进行5种抗氧化剂在食用植物油中的添加回收试验，称取1．0g样品，加入适量标样，使被加样品的5种抗氧化剂的浓度分别在0．02g&g、0．05g／l【g、0．10g水平上，然后按实验最终确定的方法进行提取实验，最终进样测定，实验设置6次重复，分别进行回收率和精密度的计算。空白样品、标准样品及添加回收色谱图如图1，实验结果见表7。从表7中可以看出，在三个水平上的5种抗氧化剂的回收率在90．7％~102．0％之间，相对标准偏差在0．24~／~2．50％之间，方法是可靠的。
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